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液相色譜法在生物堿分析中的應(yīng)用

更新時(shí)間:2015-01-08瀏覽:1847次

         生物堿是植物中一類重要化學(xué)成分,許多生物堿或含生物堿的提取物已廣泛用于醫(yī)藥領(lǐng)域,因此對(duì)不同來源的、存在于較復(fù)雜體系或基質(zhì)中的生物堿進(jìn)行快速、靈敏、可靠的定性和定量分析一直是受人矚目的研究課題。 

1、生物堿液相色譜的分析模式  
        根據(jù)液相色譜分析生物堿時(shí)所使用固定相性質(zhì)、流動(dòng)相組成及極性不同,其分析模式大致可分為:正相吸附色譜法、正相硅膠反相洗脫系統(tǒng)色譜法、反相色譜法及離子交換色譜法。 
        正相吸附色譜法:通常以硅膠基質(zhì)為吸附固定相,流動(dòng)相為不同極性的有機(jī)溶劑或不同比例混合溶劑,分離過程主要依靠生物堿與吸附劑吸附作用的差異實(shí)現(xiàn),為了改善分離,提高溶洗脫能力,常于流動(dòng)相中加濃氨液、二乙胺、三乙胺等。該法應(yīng)用于生物堿分析的文獻(xiàn)較少。  
        正相硅膠一反相洗脫系統(tǒng)色譜法(NS-RE):通常采用未經(jīng)化學(xué)改性的普通硅膠為固定相,以極性有機(jī)溶劑(甲醇、乙腈)和高pH緩沖溶液為流動(dòng)相,分析包括生物堿在內(nèi)的堿性藥物。該法柱效高,峰形對(duì)稱,是簡便有效的方法。在實(shí)際應(yīng)用中,流動(dòng)相的組成是主要的影響因素,流動(dòng)相中除含有調(diào)節(jié)pH 的緩沖鹽外,有時(shí)還要三乙胺、溴化四丁基銨等競爭離子或烷基磺酸鈉等對(duì)離子。因此,影響保留與分離的主要因素是流動(dòng)相pH、競爭離子種類及濃度 。  
        反相液相色譜法(RP-液相色譜):近年來RP-液相色譜應(yīng)用于生物堿分析方面的文獻(xiàn)很多,已成為常規(guī)的方法。但普通存在拖尾峰(tailing peak)。前者少見。>色譜峰的展寬拖尾,導(dǎo)致分離效能低,這主要緣于生物堿結(jié)構(gòu)中堿性氮原子與固定相未鍵臺(tái)酸性硅醇基的相互作用。即使是所測生物堿在較低濃度下,仍常產(chǎn)生峰漂移及峰對(duì)稱性差等現(xiàn)象。針對(duì)此缺陷,研究工作者從適用于堿性物質(zhì)分析的反相填料的設(shè)計(jì)選擇,流動(dòng)相中緩沖鹽的使用,流動(dòng)相添加劑(離子對(duì)試劑、有機(jī)胺改性劑)等幾方面進(jìn)行了較為廣泛細(xì)致的研究,并取得了一定的進(jìn)展。 
        離子交換色譜法:該法以陽離子交換樹脂為固定相,利用質(zhì)子化的生物堿陽離子與離子交換劑交換能力的差異而達(dá)到分離生物堿的目的,有關(guān)生物堿液相離子交換色譜法的應(yīng)用報(bào)道較少。 

2、生物堿液相色譜分析檢測方法  
        目前,生物堿液相色譜分析檢測方式多以紫外法為主,在定性分析方面,紫外法檢測選擇性低,定性專屬性差。隨著二極管陣列檢測器使用的普及,顯著提高了液相分析檢測的選擇性。此外,根據(jù)生物堿的理化性質(zhì),其它檢測方式如熒光法、電化學(xué)法、蒸發(fā)光散射法亦得到了應(yīng)用。近年來,液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)已應(yīng)用于生物堿分析,增強(qiáng)了對(duì)生物堿的定性檢測能力,提高了檢測靈敏度。新的接口技術(shù)及離子化方法的發(fā)展.使得HPLC-MS在生物堿的分析中得到較廣泛的應(yīng)用,近年的文獻(xiàn)報(bào)道日漸增多。 

3、生物堿液相色譜分析的樣品處理方法 
        因生物堿常具有一定的堿性,一般常用堿化液液萃取或酸水提取等方法從中草藥、中成藥及生物樣品等較復(fù)雜體系中提取純化,以達(dá)到富集和去除雜質(zhì)的目的。近年來,固相萃?。⊿PE)技術(shù)及超臨界流體萃取等現(xiàn)代提取純化技術(shù)亦應(yīng)用于樣品的提取純化。

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