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液相色譜法檢測利尿劑類藥物雙氫克尿塞

更新時間:2015-01-08瀏覽:1944次

1. 范圍
本方法采用液相色譜法檢測尿樣中利尿劑類藥物。
本方法適用于尿樣中的利尿劑雙氫克尿塞(Hydrochlorothiazide)的初篩。
檢測范圍為:200~2000ng/mL尿。
2. 原理
尿中利尿劑類藥物多以原型形式存在,可以在酸性和堿性條件下直接進行萃取?;静襟E包括:分別在酸性和堿性條件下萃取,合并后吹干,定容,測定。
3. 試劑和材料
3.1 乙酸已酯
3.2 甲醇
3.3 乙腈
3.4 鹽酸乙胺
3.5 酸性固體緩沖劑(pH約3.5)
分析純磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉按重量比99:1混合,pH約3.5。
3.6 堿性固體緩沖劑(pH約9.5)
分析純碳酸氫鈉和碳酸鉀按重量比3:2混合,pH約9.5。
3.7 Acetazolamide, Amiloride, Bendroflumethiazide, Bumetanide, Canrenone, Chlortalidone, Clopamide, Ethacrynic acid, Furosemide, Hydrochlorothiazide, Indapamide, Torasemide, Triamterene, Spironolactone, Xipamide等(美國Sigma公司產(chǎn)品)
3.8 乙酸鉛溶液,50g/L
3.9 帶蓋的普通試管
3.10 1ml小瓶
3.11 鋁蓋(11mm)
3.12 吸液尖,200μL、1mL、5mL
3.13 C18反相液相色譜柱
3.14 往復式振蕩器
3.15 旋渦混合器
3.16 離心機
4. 分析儀器
4.1 STI5000液相色譜儀(二元泵),分析柱為HP18(250mm × 0.5mm × 3μm, 填料 為C18 ,粒度為5μm),二極管陣列檢測器。
4.2 儀器條件
檢測波長為210nm,230nm,275nm,流速為1ml/min,采用磷酸鹽緩沖液(A)(pH = 3)和乙腈(B)進行梯度洗脫,
梯度為: 0 min A 85% B 15%
10 min A 70% B 30%
20 min A 65% B 35%
5. 試樣制備
檢測樣:收集的尿樣
陽性尿:由成年志愿者口服(個別需靜脈注射)利尿劑藥物的成品藥,收集
相應時間段的尿液。
 6. 操作步驟
 6.1 提取
 
6.1.1酸性提取
于5mL尿樣中加入2g酸性固體緩沖劑(pH約3.5)和4mL乙酸乙酯,震蕩提取20分鐘后離心分離。有機相中加入2mL乙酸鉛溶液(50g/L),震蕩5秒后離心分離。保留有機相。
6.1.2堿性提取
于5mL尿樣中加入2g堿性固體緩沖劑(pH約9.5)和4mL乙酸乙酯,震蕩提取20分鐘后離心分離。有機相與酸性提取的有機相合并,在50ºC下用氮氣流吹干有機相,殘渣用500μL甲醇溶解。
 6.2 儀器分析
 
取制備好的試樣于液相色譜儀上進樣10μL進行分析。
 7. 檢測結(jié)果
 
將尿樣與隨行的標準品的液相色譜圖及紫外光譜圖進行對比,如吻合即可確定該尿樣為可疑,從而完成利尿劑的初篩。
  8. 精密度
 
(略)
  9. 參考文獻
 
興奮劑檢測的有關(guān)規(guī)定及相關(guān)方法。
本篇文章來源于 液相色譜法檢測利尿劑類藥物雙氫克尿塞|科學儀器在線

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