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液相色譜儀測定水產(chǎn)品中孔雀石綠

更新時間:2009-10-13瀏覽:1642次

前言 :孔雀石綠(MG)為三苯甲烷類工業(yè)染料, 在水產(chǎn)養(yǎng)殖上可以有效的預(yù)防與治療各類水產(chǎn)動物的水霉病、鰓霉病和小蟲病。并常用于魚苗的消毒。但一些水產(chǎn)品販運(yùn)商為保持水產(chǎn)品新鮮度普遍用MG消毒車廂和活魚池;酒店為了延長魚的存活時間也在魚池中投放MG進(jìn)行消毒。使用MG消毒后的魚即使死亡后顏色也較為鮮亮,消費(fèi)者很難從外表進(jìn)行辨認(rèn)。MG在水生生物體中的主要代謝產(chǎn)物為無色孔雀石綠(LMG)。MG具有毒性強(qiáng)、高殘留和致畸、致癌、致突變等副作用。LMG由于不溶于水,其殘留毒性比MG更強(qiáng)。所以,目前世界上諸如美國、日本、加拿大和歐盟等許多國家已將MG列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物,我國也于2002年5月將其列入“食品動物禁用的獸藥及其化合物清單”(1)。雖然MG已被列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物,但因?yàn)槠鋬r格低廉,同時目前在水霉病防治上尚無其它有效藥品,因此仍有一些水產(chǎn)養(yǎng)殖戶在普遍使用。

 
   各類水產(chǎn)品中MG和LMG的檢測是我國食品衛(wèi)生學(xué)面臨的新課題。為此,我國農(nóng)業(yè)部2004年頒布了水產(chǎn)品中MG殘留量測定的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法-液相色譜法(SC/T3021-2004)(2);國家質(zhì)量監(jiān)督檢疫總局和國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會于2005年亦發(fā)布了“液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法”和“液相色譜法”((GB/T19857-2005)(3)的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法。Chang-Jun Cha等報(bào)道了(2001)采用氰基柱的反相液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)機(jī)檢測MG(4)。
在上述分析方法中,SC/T3021-2004采用C18柱,等梯度洗脫方式,但需要較大流速(2ml/min);而 GB/T19857-2005法采用C18柱,梯度洗脫方式。文獻(xiàn)(4)采用氰基柱分離的梯度洗脫方式。我們在研究這些分析方法的基礎(chǔ)上,采用氰基柱分離、流速為1.0mL/min的等梯度洗脫方式,具有保留時間短、分離效果好、分析速度快、節(jié)省試劑;zui低檢測濃度無LMG為0.02μg/mL,MG為0.05μg/mL。精密度高;特別是線性范圍達(dá)0.1μg/mL~160.0μg/mL,遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于 SC/T3021-2004線性范圍(MG 0.01μg/m L~0.4μg/mL;LMG0.02μg/mL~0.40μg/mL)。而且,等梯度洗脫方式又?jǐn)U大了液相色譜的應(yīng)用范圍?,F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下:
1.      材料與方法
1.     1材料
1.1.1試劑
    乙睛 色譜純,fishte ;
    乙酸銨 ,hplc純 ,DIKMA;
    孔雀石綠(MG) sigma試劑;
    無色孔雀石綠(LMG)  sigma試劑。
0.125mol/L乙酸銨溶液  稱取乙酸銨9.64 g,用純水溶解并定容至1000mL。用0.45μm濾膜過濾。
MG標(biāo)準(zhǔn)儲備液  準(zhǔn)確稱取孔雀石綠0.100 0g,用乙睛溶解并定容至100 mL。該標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為1mg/mL。避光、冰箱冷凍層保存。    
MG標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 吸取1mg/mL孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)儲備液用乙睛稀釋至1.0μg/mL。
LMG標(biāo)準(zhǔn)儲備液 準(zhǔn)確稱取孔雀石綠0.100 0g,用乙睛溶解并定容至100mL。該標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為1mg/mL。
    LMG標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液  吸取1mg/mL無色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)儲備液用乙睛稀釋至1.0μg/mL。
MG和LMG標(biāo)準(zhǔn)混合溶液  分別吸取MG和LMG標(biāo)準(zhǔn)儲備液,用乙睛稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。
1.1.2 儀器
  液相色譜儀。具UV-VIS、在線脫氣機(jī)、高壓泵、柱恒溫箱、色譜工作站。
1.2 步驟
1.2.1 色譜條件
   檢測器  紫外-可見光檢測器,波長618nm;
   色譜柱  氰基柱,4.6mm×250mm,5μm;
   流動相  乙睛-0.125mol/L乙酸銨(pH4.5)=(47+53);
   柱溫  35℃;
   進(jìn)樣量  20μL。
1.2.2  測定步驟
吸取MG和LMG標(biāo)準(zhǔn)混合溶液(5.0μg/mL)注入色譜儀,在上述色譜條件下,繪制色譜圖。見圖1。

 

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